طراحی و ساخت ناقل خاموشگر rna تداخلگر (rnai) نسل دوم برای بررسی کاهش بیان ژن کمک فعالکننده rna گیرنده استروئیدی (sra)
نویسندگان
چکیده
هدف: روش تداخل rna یا rnai بهترین روش خاموش کردن ژنها در سطح ترانسکریپتومی شناخته شده است، سرطانها و بیماریهای ژنتیکی اهداف مهمی برای توسعه روشهای درمانی مبتنی بر rnai بهشمار میروند. برای حل مشکل خاموشی موقتی سیستمهای sirna، rnaهای سنجاق سری یا shrnaها ابداع شدند و نسل جدید shrnaها به نام shrnamir است. سازه خاموشگر با ساختار سنجاق سری شبه microrna (shrnamir)، رفتاری مشابه یک microrna طبیعی را درون سلول تقلید میکند. کمک فعالکننده گیرنده استروئیدی (sra) یکی از تنظیمکنندههای گیرنده استروئیدی از جمله گیرنده استروژنی (er) است. بافتهای پروستات، رحم و سینه بیان پایینی از sra دارند، در حالیکه طی تومورزایی آنها بیان sra افزایش مییابد، بنابراین امکان شرکت sra در تومورزایی یا پیشروی توموری وجود دارد. مواد و روشها: در مطالعه حاضر از روش rna تداخلگر یا rnai برای خاموش نمودن ژن sra استفاده شد و سازه خاموشگر sra طراحی و توسط soe-pcr ساخته شد و سپس در پلاسمید pegfpc1 که یک ناقل بیانی است کلون گردید. رده سلولی انسانی سرطان پستان (mcf7) با پلاسمید حاصل ترانسفکت شد و بیان sra در زمانهای 24، 72 ساعت و 10روز بعد با real-time pcr بررسی شد. نتایج: کاهش 60 درصدی در بیان نسبی sra در تیمارهای 72 ساعت و 10روز بعد مشاهده شد که نشان میدهد shrnamir-sra با موفقیت توانسته است بیان ژن هدف مطالعه حاضر را بهطور نسبتاً پایداری خاموش کند. نتیجهگیری: با توجه به موفقیت در طراحی و ساخت یک سازه shrnamir و خاموشی نسبتاً پایدار ژن هدف، این سازه برای مطالعات مختلفی در آینده آماده و مناسب بهنظر میرسد.
منابع مشابه
خاموش کردن ژن اکتیواتور rna گیرنده استروئیدی(sra) با استفاده از تکنیک تداخلrna (rnai) و بررسی اثر آن بر ژن گیرنده پروژسترون(pr) در رده سلولی mcf7
چکیده کمک فعال کننده گیرنده استروئیدی (sra ) یکی از تنظیم کننده های گیرنده استروئیدی از جمله گیرنده استروژنی er است و به صورت یک مولکول rna عمل خود را انجام می دهد. بافت های پروستات ، رحم و سینه بیان پایینی از sra دارند، درحالیکه افزایش بیان sra طی تومور زایی آنها وجود دارد، بنابراین امکان شرکت sra در تومور زایی یا پیشروی توموری وجود دارد.این مطالعه به منظور فهمیدن نقش sra در درون سلول صورت گ...
15 صفحه اولمهار بیان ژن GFP به وسیله تداخل RNA (RNAi) در دودمان سلولی کارسینومای جنینی P19
Introduction: RNA interference (RNAi) is a phenomenon of gene silencing that uses double-stranded RNA (dsRNA), specifically inhibits gene expression by degrading mRNA efficiently. The mediators of degradation are 21- to 23-nt small interfering RNAs (siRNA). The use of siRNAs as inhibitors of gene expression has been shown to be an effective way of studying gene function in mammalian cells. Ai...
متن کاملشناسایی و تعیین توالی 7 ژن RNA ناقل میتوکندریایی در مرغ بومی خراسان
هدف این پژوهش بررسی و تعیین توالی نوکلئوتیدی 7 ژن tRNA در ژنوم میتوکندری مرغ بومی خراسان و شناسایی جهش‌های احتمالی در آن بود. بدین منظور پس از نمونه گیری و استخراج DNA از خون، این بخش از ژنوم با استفاده از آغازگرهای اختصاصی تکثیر و در پلاسمید pTG19-T در سویه <...
متن کاملمهار بیان ژن gfp به وسیله تداخل rna (rnai) در دودمان سلولی کارسینومای جنینی p۱۹
مقدمه: تداخل ( rnai) rna نوعی پدیده خاموشی ژن است که در آن rna دو رشته ای ( dsrna ) با تخریب مؤثر mrna به طور اختصاصی، از بیان ژن جلوگیری می کند. واسطه این تخریب، rna های تداخل گر کوچک ( sirna) 21-23 نوکلئوتیدی هستند. نشان داده شده است که استفاده از sirna به عنوان ممانعت کننده بیان ژن، روشی مؤثر برای مطالعه عملکرد ژن در سلول های پستانداران است. هدف: بررسی قابلیت sirna برای خاموشی ژن egfp در س...
متن کاملan introduction to rna interference (rnai)
the discovery of rna interference (rnai) in recent years has revolutionized biological and medical research. rnai is the sequence-specific gene silencing triggered by double-stranded rna (dsrna). until a couple of years ago only biologists working with caenorhabditis elegans and plants could use rnai technology to gain insight into gene function……
متن کاملdesigning and development of a silencer vector based on second generation of rna interference (rnai) technique to study downregulation of steroid receptor rna activator (sra)
objective: rna interference (rnai) is the most potent technique for gene silencing in eukaryotic cellular system at transcriptomic level. genetic disorders and cancers are important targets for therapeutic development of this technique. in order to bypass the temporary dpwnregulation by sirna, a new generation of shrna named shrnamir has developed. silencing construct with structure similar to ...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
عنوان ژورنال:
پژوهش های آسیب شناسی زیستیجلد ۱۲، شماره ۳، صفحات ۳۳-۳۹
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023